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小知识 | 流式细胞术检测细胞周期

作者:小科    发布日期:2021-04-21 09:00


细胞周期cell cycle 是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程,它反映了细胞增殖的速度。在临床上,有很多研究证明,细胞周期分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。

一个完整的细胞周期包含间期和分裂期(M期)两个阶段,间期又分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)和DNA合成后期(G2期),处于不同时期的细胞的DNA 含量存在差异。一般认为,G 1 期细胞具有增殖活性,参与细胞周期循环,是二倍体细胞;S 期细胞,DNA 含量逐渐增加,从二倍体变成四倍体,随后进入 G 2 期,最终进入 M 期。检测细胞周期常用的方法是检测DNA含量,可以选择能与DNA结合的荧光染料(如PI等),再根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同的方法,分析各个阶段的细胞比例。
 


 


联科生物可以提供两种细胞周期检测试剂盒,在组分上,#CCS01是DNA染色液和破膜剂的混合装;#CCS012为DNA染色液和破膜剂的独立包装。在用途上,#CCS01可用于一步法活细胞细胞周期检测,固定细胞也可用,但推荐用#CCS012效果更佳;#CCS012可用于活细胞和固定细胞的细胞周期检测。
 

 

 

〈 细胞周期流式细胞术  分析步骤 〉


一、可当天检测的活细胞样本

1. 收集2 × 105- 1 × 106个细胞,离心弃上清。用PBS洗涤一次,离心弃上清。

2. 加入1 ml DNA Staining solution和10 μl Permeabilization solution,涡旋振荡5 - 10秒混匀。室温避光孵育30分钟。

3. 选择最低上样速度,在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察,则离心细胞,弃上清,加入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片,盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。


二、当天无法检测的活细胞样本

1. 按照下述方法固定,或其他合适的方法固定

   a. 收集2 × 105- 1 × 106个细胞,离心弃上清。轻弹管壁,使沉淀重悬在残余的液体中,加入1 ml 室温下的PBS。

   b. 将细胞缓慢加入至3 ml无水乙醇(-20℃预冷)中,边加边高速搅拌。-20℃固定过夜,可保存数月。

2. 检测当天,将固定细胞离心,弃去乙醇,轻弹管壁使沉淀松散,加入2 - 5 ml 室温下的PBS,放置15分钟使细胞再次水化。离心,弃上清。

3. 加入1 ml DNA staining solution,涡旋振荡5 - 10秒混匀。室温避光孵育30分钟。

4. 选择最低上样速度,在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察,则离心细胞,弃上清,加入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片,盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。

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